Provasoli ES (обогащённая морская вода)

Среда для требовательных морских микроводорослей

Применение: Морские жгутиковые, гаптофитовые, красные и бурые микроводоросли, зооспоры макрофитов
pH: 7,8–8,2
Источник: Provasoli, 1968

Состав

Компонент	Количество на 1 л
Морская вода	980 мл
Маточный раствор ES	20 мл

Маточный раствор ES (по Провазоли)

на 1 л · расход 20 мл на 1 л среды · хранение 4 °C в тёмном стекле, 6 мес.

Компонент	Навеска / объём
NaNO₃	3,5 г
Na₂-глицерофосфат	0,5 г
Трис (Tris)	0,5 г
Раствор металлов P II	25 мл
Раствор Fe-ЭДТА (1:1)	2,5 мл
Раствор тиамина (1 г/л)	0,5 мл
Раствор биотина (10 мг/л)	0,5 мл
Раствор B₁₂ (10 мг/л)	1,0 мл
Дистиллированная вода	до 1000 мл

Раствор металлов P II (по Провазоли) — рабочий раствор

на 100 мл · расход 25 мл на 1 л маточного раствора ES · хранение 4 °C, 12 мес.

Компонент	Навеска / объём
H₃BO₃	114 мг
Na₂ЭДТА	100 мг
MnSO₄·4H₂O	16,4 мг
Первичный раствор FeCl₃	1 мл
Первичный раствор ZnSO₄	1 мл
Первичный раствор CoSO₄	1 мл
Дистиллированная вода	до 100 мл

Первичные растворы для P II (готовятся раздельно)

каждый на 100 мл · из каждого берут по 1 мл · хранение 4 °C, 12 мес.

Компонент	Навеска / объём
FeCl₃·6H₂O	0,490 г на 100 мл
ZnSO₄·7H₂O	0,220 г на 100 мл
CoSO₄·7H₂O	0,048 г на 100 мл

Раствор Fe-ЭДТА (1:1) для Provasoli ES

на 100 мл · расход 2,5 мл на 1 л маточного раствора ES · хранение 4 °C, 6 мес.

Компонент	Навеска / объём
Fe(NH₄)₂(SO₄)₂·6H₂O (соль Мора)	70,2 мг
Na₂ЭДТА	60,0 мг
Дистиллированная вода	до 100 мл

Приготовление

Морскую воду профильтровать и стерилизовать отдельно. Маточный раствор ES стерилизовать фильтрацией (в нём витамины). В остывшую морскую воду асептически внести 20 мл маточного раствора.

Примечания

Na₂-глицерофосфат — органический источник фосфора с медленным высвобождением. Он практически не даёт осадка фосфатов кальция при автоклавировании, что и является главным преимуществом среды для морских культур.
Варианты ES/2 и ES/4 (10 и 5 мл маточного раствора на литр) применяют для олиготрофных видов, плохо переносящих богатую среду.
Tris в составе маточного раствора стабилизирует pH после внесения концентрата в морскую воду.
Готовится на литр из-за большого расхода (20 мл/л): литра хватает на 50 л среды. Содержит витамины, поэтому НЕ автоклавируется — стерилизуется фильтрацией через 0,22 мкм. Растворы витаминов: тиамин 100 мг на 100 мл, биотин 1 мг на 100 мл, B₁₂ 1 мг на 100 мл; итоговые концентрации в маточном растворе — 0,5 мг/л тиамина, 5 мкг/л биотина, 10 мкг/л B₁₂.
Na₂ЭДТА растворяют первым, соли железа — последними.
Раствор FeCl₃ подкисляют 1 каплей конц. HCl, иначе железо гидролизуется уже при хранении.
Обе соли растворяют совместно и перемешивают 30 мин до образования комплекса — появляется устойчивая жёлтая окраска без осадка. Мольное соотношение Fe:ЭДТА равно 1:1 (по 1,79 ммоль/л каждого).