← Назад
В. Щелочные среды для Arthrospira (Spirulina) и алкалофильных форм
ZARROUKСреда Заррука (Zarrouk)
Стандартная среда для культивирования спирулины
- Применение
- Arthrospira platensis, A. maxima и другие алкалофильные и галоалкалофильные цианобактерии
- pH
- 8,5–11,0 (рабочий оптимум 9,5–10,0)
- Источник
- Zarrouk, 1966
Состав
| Компонент | Количество на 1 л |
|---|---|
| NaHCO₃ | 16,8 г |
| K₂HPO₄ | 0,5 г |
| NaNO₃ | 2,5 г |
| K₂SO₄ | 1,0 г |
| NaCl | 1,0 г |
| MgSO₄·7H₂O | 0,2 г |
| CaCl₂ (безводн.) | 0,04 г (или CaCl₂·2H₂O 0,053 г) |
| FeSO₄·7H₂O | 0,01 г |
| Na₂ЭДТА | 0,08 г |
| Раствор микроэлементов A5 | 1,0 мл |
| Раствор редких металлов B6 | 1,0 мл |
| Дистиллированная вода | до 1000 мл |
Раствор микроэлементов A5 + Co
на 100 мл раствора · расход 1 мл на 1 л среды (хватает на 100 л) · хранение 4 °C в тёмном стекле, 12 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| H₃BO₃ | 286 мг |
| MnCl₂·4H₂O | 181 мг |
| ZnSO₄·7H₂O | 22,2 мг |
| Na₂MoO₄·2H₂O | 39,0 мг |
| CuSO₄·5H₂O | 7,9 мг |
| Co(NO₃)₂·6H₂O | 4,94 мг (или 1 мл первичного р-ра 4,94 г/л) |
| Дистиллированная вода | до 100 мл |
Раствор редких металлов B6 (по Зарруку)
на 100 мл раствора · расход 1 мл на 1 л среды · хранение 4 °C, 12 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| K₂Cr₂(SO₄)₄·24H₂O | 9,6 мг |
| NiSO₄·7H₂O | 4,78 мг (1 мл первичного р-ра 4,78 г/л) |
| Co(NO₃)₂·6H₂O | 4,40 мг (1 мл первичного р-ра 4,40 г/л) |
| Ti₂(SO₄)₃ | 4,00 мг (1 мл первичного р-ра 4,00 г/л) |
| NH₄VO₃ | 2,29 мг (1 мл первичного р-ра 2,29 г/л) |
| Na₂WO₄·2H₂O | 1,79 мг (1 мл первичного р-ра 1,79 г/л) |
| Дистиллированная вода | до 100 мл |
Приготовление
Готовят ДВА раствора. Раствор «А» (500 мл): NaHCO₃ 16,8 г + K₂HPO₄ 0,5 г. Раствор «Б» (500 мл): NaNO₃ → K₂SO₄ → NaCl → MgSO₄·7H₂O → CaCl₂ → комплекс FeSO₄ + ЭДТА → 1 мл A5 → 1 мл B6. Оба раствора стерилизуют раздельно и сливают только после полного охлаждения до комнатной температуры.
Примечания
- КРИТИЧЕСКИЙ МОМЕНТ: NaHCO₃ и CaCl₂ нельзя смешивать в концентрированном виде — мгновенно выпадает CaCO₃. Отсюда обязательное разделение на растворы «А» и «Б».
- NaHCO₃ разлагается при автоклавировании с выделением CO₂ и подщелачиванием до pH 10,5–11. Раствор «А» предпочтительно стерилизовать фильтрацией через мембрану 0,22 мкм; при автоклавировании целевой pH задают на 0,5–1,0 единицы ниже.
- Комплекс железа готовят заранее: FeSO₄·7H₂O 0,01 г и Na₂ЭДТА 0,08 г (соотношение ≈ 1:8 по массе) растворяют в 50 мл воды и перемешивают 30 мин до устойчивой жёлто-соломенной окраски без осадка. Без ЭДТА железо при pH 10 полностью выпадает в виде Fe(OH)₃.
- Молярные эквиваленты: NaHCO₃ — 200 мМ (главный источник углерода и щёлочности); NaNO₃ — 29,4 мМ.
- Высокий pH сам по себе служит защитой от контаминации: при pH выше 9,5 подавляющее большинство зелёных микроводорослей и бактерий не развивается — на этом и построено промышленное культивирование спирулины в открытых прудах.
- Соли растворяют по одной, в указанном порядке; H₃BO₃ растворяется медленно — допускается подогрев до 40 °C. Кобальт вносят из первичного раствора: навеску 4,94 мг взвесить на обычных весах невозможно. Первичный раствор Co: 494 мг Co(NO₃)₂·6H₂O в 100 мл воды, взять 1 мл. Без кобальта раствор называется просто «A5». Появление осадка или помутнения — признак негодности.
- Первичные растворы готовят на 100 мл: указанная концентрация в г/л означает навеску в десять раз меньшую на 100 мл (например, для NH₄VO₃ — 229 мг на 100 мл). Ti₂(SO₄)₃ гидролизуется — готовый раствор подкисляют 0,1 мл конц. H₂SO₄. Раствор B6 не обязателен: при культивировании на технической воде эти элементы присутствуют как примеси.