← Назад
Г. Среды для пресноводных зелёных микроводорослей
WCWC (Guillard's Freshwater medium)
Пресноводный аналог f/2
- Применение
- Пресноводные диатомовые, зелёные, золотистые и криптофитовые микроводоросли; коллекция CCMP
- pH
- 7,2–7,6
- Источник
- Guillard & Lorenzen, 1972
Состав
| Компонент | Количество на 1 л |
|---|---|
| NaNO₃ | 85,01 мг |
| CaCl₂·2H₂O | 36,76 мг |
| MgSO₄·7H₂O | 36,97 мг |
| NaHCO₃ | 12,60 мг |
| K₂HPO₄ | 8,71 мг |
| Na₂SiO₃·9H₂O | 28,42 мг |
| Трис (Tris) | 500 мг (или HEPES 2,38 г) |
| Раствор микроэлементов f/2 | 1,0 мл |
| Раствор витаминов | 0,5 мл |
| Дистиллированная вода | до 1000 мл |
Раствор микроэлементов f/2 (по Гилларду) — рабочий раствор
на 100 мл раствора · расход 1 мл на 1 л среды · хранение 4 °C, 12 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| Na₂ЭДТА·2H₂O | 436 мг |
| FeCl₃·6H₂O | 315 мг |
| MnCl₂·4H₂O | 18,0 мг (или 1 мл первичного р-ра № 1) |
| Первичный раствор № 2 (ZnSO₄) | 1 мл |
| Первичный раствор № 3 (CoCl₂) | 1 мл |
| Первичный раствор № 4 (CuSO₄) | 1 мл |
| Первичный раствор № 5 (Na₂MoO₄) | 1 мл |
| Дистиллированная вода | до 100 мл |
Первичные растворы микроэлементов f/2 (каждый готовится отдельно)
каждый на 100 мл · из каждого берут по 1 мл на 100 мл рабочего раствора · хранение 4 °C, 12 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| № 1 — MnCl₂·4H₂O | 1,80 г на 100 мл |
| № 2 — ZnSO₄·7H₂O | 0,220 г на 100 мл |
| № 3 — CoCl₂·6H₂O | 0,100 г на 100 мл |
| № 4 — CuSO₄·5H₂O | 0,098 г на 100 мл |
| № 5 — Na₂MoO₄·2H₂O | 0,063 г на 100 мл |
Раствор витаминов (стандартная пропись f/2) — рабочий раствор
на 100 мл раствора · расход 0,5 мл на 1 л среды · хранение −20 °C аликвотами по 1–2 мл, 6 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| Тиамин·HCl (витамин B₁) | 20 мг |
| Первичный раствор биотина | 1 мл |
| Первичный раствор B₁₂ | 1 мл |
| Дистиллированная вода | до 100 мл |
Первичные растворы витаминов (готовятся раздельно)
каждый на 100 мл · из каждого берут по 1 мл на 100 мл рабочего раствора · хранение −20 °C, 6 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| Биотин (витамин H) | 10 мг на 100 мл |
| Цианокобаламин (витамин B₁₂) | 10 мг на 100 мл |
Приготовление
Растворить NaNO₃ → MgSO₄·7H₂O → K₂HPO₄ → NaHCO₃ → Tris → 1 мл раствора микроэлементов → CaCl₂·2H₂O → довести pH до 7,2–7,6 → последним внести Na₂SiO₃·9H₂O → долить до 1000 мл → автоклавировать → в остывшую среду стерильно внести 0,5 мл раствора витаминов.
Примечания
- Силикат вносят последним и только в среду с уже установленным pH — иначе выпадает аморфный SiO₂. Для не-диатомовых культур Na₂SiO₃ исключают.
- Витамины вносят после автоклавирования и охлаждения, стерильной фильтрацией.
- Вариант без Tris используют при культивировании с подачей CO₂, где буфер не нужен и даже мешает контролю карбонатной системы.
- Порядок: сначала растворяют Na₂ЭДТА, затем FeCl₃ (мольное соотношение ≈ 1:1, раствор становится жёлто-соломенным), затем по 1 мл каждого первичного раствора. Микроэлементы вносят именно из первичных растворов — точно взвесить 0,6–2 мг невозможно.
- Пять растворов готовят и хранят в отдельных флаконах с чёткой маркировкой. Смешивать их между собой до внесения в рабочий раствор нельзя.
- Витамины НЕ автоклавируют — только стерильная фильтрация через мембрану 0,22 мкм. Тиамин при 121 °C разрушается на 40–70 % и деградирует при pH выше 8 даже без нагрева, поэтому витамины вносят в остывшую среду непосредственно перед посевом. Повторное замораживание аликвот недопустимо.
- Биотин плохо растворим в холодной воде — его растворяют в 1 мл 50 % этанола или в тёплой воде при pH 8, затем доводят объём. Раствор B₁₂ имеет характерную розово-красную окраску; обесцвечивание означает разложение витамина.