Д. Среды на основе морской воды
GUILLARD_F2f/2 (среда Гилларда)
Главная мировая среда для морского фитопланктона
- Применение
- Nannochloropsis, Isochrysis, Tetraselmis, Pavlova, морские диатомовые и жгутиковые; аквакультура
- pH
- 8,0–8,2 (естественный pH морской воды)
- Источник
- Guillard & Ryther, 1962; Guillard, 1975
Состав
| Компонент | Количество на 1 л |
|---|---|
| Морская вода (фильтр. 0,22 мкм) | 1000 мл |
| NaNO₃ | 75 мг (1 мл р-ра 7,5 г на 100 мл) |
| NaH₂PO₄·H₂O | 5 мг (1 мл р-ра 0,5 г на 100 мл) |
| Na₂SiO₃·9H₂O | 30 мг (только f/2 + Si, для диатомовых) |
| Раствор микроэлементов f/2 | 1,0 мл |
| Раствор витаминов | 0,5 мл |
Раствор микроэлементов f/2 (по Гилларду) — рабочий раствор
на 100 мл раствора · расход 1 мл на 1 л среды · хранение 4 °C, 12 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| Na₂ЭДТА·2H₂O | 436 мг |
| FeCl₃·6H₂O | 315 мг |
| MnCl₂·4H₂O | 18,0 мг (или 1 мл первичного р-ра № 1) |
| Первичный раствор № 2 (ZnSO₄) | 1 мл |
| Первичный раствор № 3 (CoCl₂) | 1 мл |
| Первичный раствор № 4 (CuSO₄) | 1 мл |
| Первичный раствор № 5 (Na₂MoO₄) | 1 мл |
| Дистиллированная вода | до 100 мл |
Первичные растворы микроэлементов f/2 (каждый готовится отдельно)
каждый на 100 мл · из каждого берут по 1 мл на 100 мл рабочего раствора · хранение 4 °C, 12 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| № 1 — MnCl₂·4H₂O | 1,80 г на 100 мл |
| № 2 — ZnSO₄·7H₂O | 0,220 г на 100 мл |
| № 3 — CoCl₂·6H₂O | 0,100 г на 100 мл |
| № 4 — CuSO₄·5H₂O | 0,098 г на 100 мл |
| № 5 — Na₂MoO₄·2H₂O | 0,063 г на 100 мл |
Раствор витаминов (стандартная пропись f/2) — рабочий раствор
на 100 мл раствора · расход 0,5 мл на 1 л среды · хранение −20 °C аликвотами по 1–2 мл, 6 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| Тиамин·HCl (витамин B₁) | 20 мг |
| Первичный раствор биотина | 1 мл |
| Первичный раствор B₁₂ | 1 мл |
| Дистиллированная вода | до 100 мл |
Первичные растворы витаминов (готовятся раздельно)
каждый на 100 мл · из каждого берут по 1 мл на 100 мл рабочего раствора · хранение −20 °C, 6 мес.
| Компонент | Навеска / объём |
|---|---|
| Биотин (витамин H) | 10 мг на 100 мл |
| Цианокобаламин (витамин B₁₂) | 10 мг на 100 мл |
Приготовление
Морскую воду профильтровать и автоклавировать (либо пастеризовать), охладить. Приготовить концентраты на 100 мл: NaNO₃ 7,5 г и NaH₂PO₄·H₂O 0,5 г — брать по 1 мл на литр. В остывшую стерильную морскую воду асептически внести 1 мл нитрата, 1 мл фосфата, 1 мл раствора микроэлементов, 0,5 мл раствора витаминов; силикат — отдельным стерильным раствором (3 г на 100 мл), 1 мл на литр.
Примечания
- Название «f/2» означает разведение исходной среды «f» в два раза. Применяются также f/4 и f/10 (для олиготрофных видов) и «f» (двойная концентрация, интенсивный рост).
- Морскую воду стерилизуют ОТДЕЛЬНО, биогены вносят после охлаждения: автоклавирование морской воды с фосфатом и силикатом даёт коллоидный SiO₂ и осадок карбонатов.
- Пастеризация (80 °C, 30 мин, трёхкратно с интервалом 24 ч) — щадящая альтернатива автоклавированию, сохраняющая карбонатное равновесие морской воды.
- Молярные эквиваленты: NaNO₃ — 882 мкМ; NaH₂PO₄·H₂O — 36,2 мкМ (соотношение N:P ≈ 24:1).
- Порядок: сначала растворяют Na₂ЭДТА, затем FeCl₃ (мольное соотношение ≈ 1:1, раствор становится жёлто-соломенным), затем по 1 мл каждого первичного раствора. Микроэлементы вносят именно из первичных растворов — точно взвесить 0,6–2 мг невозможно.
- Пять растворов готовят и хранят в отдельных флаконах с чёткой маркировкой. Смешивать их между собой до внесения в рабочий раствор нельзя.
- Витамины НЕ автоклавируют — только стерильная фильтрация через мембрану 0,22 мкм. Тиамин при 121 °C разрушается на 40–70 % и деградирует при pH выше 8 даже без нагрева, поэтому витамины вносят в остывшую среду непосредственно перед посевом. Повторное замораживание аликвот недопустимо.
- Биотин плохо растворим в холодной воде — его растворяют в 1 мл 50 % этанола или в тёплой воде при pH 8, затем доводят объём. Раствор B₁₂ имеет характерную розово-красную окраску; обесцвечивание означает разложение витамина.