← Артқа
Г. Тұщы су жасыл микробалдырларына арналған орталар
3N-BBM-V3N-BBM + V
Азоты үш есе көп әрі витаминдері бар BBM
- Қолданылуы
- Жасыл микробалдырлардың талапшыл штаммдары, витаминдер бойынша ауксотрофтар; CCAP коллекциясының стандарты
- pH
- 6,6
- Дереккөз
- CCAP; Bischoff & Bold модификациясы
Құрамы
| Компонент | 1 л-ге мөлшері |
|---|---|
| NaNO₃ | 0,75 г (BBM-нен ×3) |
| CaCl₂·2H₂O | 0,025 г |
| MgSO₄·7H₂O | 0,075 г |
| K₂HPO₄ | 0,075 г |
| KH₂PO₄ | 0,175 г |
| NaCl | 0,025 г |
| ЭДТА-KOH ерітіндісі | 1,0 мл |
| Темір ерітіндісі (FeSO₄-H₂SO₄) | 1,0 мл |
| Бор қышқылының ерітіндісі | 1,0 мл |
| BBM микроэлементтер ерітіндісі | 1,0 мл |
| Тиамин ерітіндісі (B₁) | 1,0 мл |
| Цианокобаламин ерітіндісі (B₁₂) | 1,0 мл |
| Дистилденген су | 1000 мл-ге дейін |
BBM үшін ЭДТА-KOH ерітіндісі
100 мл-ге · 1 л ортаға 1 мл шығыны · сақтау 4 °C, 6 ай
| Компонент | Өлшенді / көлемі |
|---|---|
| Na₂ЭДТА | 5,0 г |
| KOH | 3,1 г |
| Дистилденген су | 100 мл-ге дейін |
BBM үшін темір ерітіндісі (FeSO₄-H₂SO₄)
100 мл-ге · 1 л ортаға 1 мл шығыны · сақтау 4 °C қараңғы шыныда, 2–3 ай
| Компонент | Өлшенді / көлемі |
|---|---|
| FeSO₄·7H₂O | 498 мг |
| H₂SO₄ (конц.) | 0,1 мл (2 тамшы) |
| Дистилденген су | 100 мл-ге дейін |
BBM үшін бор қышқылының ерітіндісі
100 мл-ге · 1 л ортаға 1 мл шығыны · сақтау 4 °C, 12 ай
| Компонент | Өлшенді / көлемі |
|---|---|
| H₃BO₃ | 1,142 г |
| Дистилденген су | 100 мл-ге дейін |
BBM микроэлементтер ерітіндісі (Болд бойынша)
100 мл ерітіндіге · 1 л ортаға 1 мл шығыны · сақтау 4 °C, 6 ай
| Компонент | Өлшенді / көлемі |
|---|---|
| ZnSO₄·7H₂O | 882 мг |
| CuSO₄·5H₂O | 157 мг |
| MnCl₂·4H₂O | 144 мг |
| MoO₃ | 71 мг (немесе Na₂MoO₄·2H₂O 119 мг) |
| Co(NO₃)₂·6H₂O | 49 мг |
| Дистилденген су | 100 мл-ге дейін |
3N-BBM + V үшін тиамин (B₁) ерітіндісі
100 мл-ге · 1 л ортаға 1 мл шығыны · сақтау −20 °C, 6 ай
| Компонент | Өлшенді / көлемі |
|---|---|
| Тиамин·HCl | 1,2 мг (немесе 0,12 г/л бастапқы ерітіндіден 1 мл) |
| Дистилденген су | 100 мл-ге дейін |
3N-BBM + V үшін цианокобаламин (B₁₂) ерітіндісі
100 мл-ге · 1 л ортаға 1 мл шығыны · сақтау −20 °C, 6 ай
| Компонент | Өлшенді / көлемі |
|---|---|
| Цианокобаламин (B₁₂) | 1,0 мг (немесе 0,1 г/л бастапқы ерітіндіден 1 мл) |
| Дистилденген су | 100 мл-ге дейін |
Дайындау
BBM ретін толық қайталайды (кальций — соңғы болып), содан кейін орта автоклавталады, бөлме температурасына дейін суытылады және тек содан кейін ғана стерильді сүзілген витамин ерітінділерінен 1 мл-ден енгізіледі.
Ескертулер
- Витаминдерді ортамен бірге ЕШҚАШАН автоклавтауға болмайды: тиамин 121 °C-та 40–70 %-ға ыдырайды, бұл ортаны дәл сол өзі үшін дайындалатын ауксотрофтарға пайдасыз етеді.
- Ортадағы витаминдердің қорытынды концентрациялары: тиамин·HCl — 0,012 мг/л, цианокобаламин — 0,01 мг/л.
- Витаминдер ерітінділері −20 °C-та 1–2 мл аликвоталармен сақталады; жарамдылық мерзімі 6 ай, қайта мұздатуға болмайды.
- Сілті бірінші болып енгізіледі: бейтарап суда ЭДТА өте баяу ериді. Ерітінді темір ерітіндісінен бөлек сақталады — концентраттарды араластырғанда тұнба түзіледі.
- Күкірт қышқылы консервант рөлін атқарады: онсыз Fe²⁺ тез арада Fe³⁺-ке дейін тотығып, гидроксид түрінде тұнбаға түседі. Тат түсті лайдың пайда болуы — жарамсыздық белгісі, ерітінді әр 2–3 ай сайын жаңартылады.
- Болд рецептурасында бор жоғары концентрациясына байланысты жалпы микроэлементтер ерітіндісінен бөлек ерітіндіге шығарылған. Баяу ериді — 40 °C-қа дейін жылыту керек.
- Молибден триоксиді MoO₃ суда іс жүзінде ерімейді — оны алдын ала 0,1 мл 1 М NaOH-та ерітеді. Na₂MoO₄·2H₂O-ға эквимолярлы ауыстырғанда бұл қадам қажет емес.
- Тиаминнің бастапқы ерітіндісі: 100 мл-ге 12 мг; одан 1 мл алынады. Ортадағы қорытынды концентрациясы — 0,012 мг/л. Зарарсыздандыру тек сүзу арқылы (0,22 мкм).
- B₁₂ бастапқы ерітіндісі: 100 мл-ге 10 мг; одан 1 мл алынады. Ортадағы қорытынды концентрациясы — 0,01 мг/л. Витаминдердің екі ерітіндісі бөлек дайындалып, бөлек сақталады.